مقالات

توالی یابی سنگر

تکنیک توالی یابی DNA یکی از مهمترین موفقیت های بشر در علم پزشکی محسوب می شود.
از این تکنیک در گرایش های پژوهشی و کاربردی وسیعی مانند تشخیص بیماری های ژنتیکی، زیست فناوری و پزشکی قانونی
استفاده می شود.
بنابراین شناخت روش های تعیین توالی و نحوه آنالیز داده های آنها برای تمامی افرادی که در زمینه های مربوط به علوم پزشکی و
زیست شناسی فعالیت دارند ضروری می باشد.
به طور کلی روش های تعیین توالی DNA به سه نسل اول-دوم-سوم تقسیم بندی می شوند.
روش توالی یابی سنگر یا خاتمه زنجیره یکی از تکنیک های targeted base نسل اول می باشد که در سال 1977 توسط فردریک
سنگر و همکارانش ابداع شد و انقلابی در فناوری تعیین توالی برپا کرد، شرکت Applied Biosystems برای نخستین بار آن را
تجاری سازی نمود.

این تکنیک در مقایسه با سایر روش ها بسیار دقیق تر می باشد و کاربرد آسان تری دارد. به همین دلیل برای تعیین توالی اولین ژنوم انسانی از آن در پروژه ژنوم انسانی استفاده شد.

توالی یابی سنگر روشی بسیار قوی و مناسب برای شناسایی جهش های نقطه ای (SNV) یا حذف و اضافه های کوچک (INDEL) رخ داده در ژنوم می باشد. طی 30 سال گذشته هزینه ی توالی یابی سنگر به میزان قابل ملاحظه ای کاهش یافته است همچنین با پیدایش دستگاه های توالی یابی خودکار که قابلیت توالی یابی همزمان 96 نمونه را دارند، سرعت توالی یابی DNA به شدت افزایش یافته است.

در اصل توالی یابی سنگر در حال حاضر روش اصلی (Gold Standard) جهت توالی یابی قطعات بکار رفته در کلونینگ و محصولات حاصل از PCR می باشد. از طرفی به عنوان یک روش مناسب و قابل اطمینان برای تأیید جهش های شناسایی شده در روش توالی یابی NGS و تکنیک های دیگر ژنتیک مولکولی به وفور مورد استفاده قرار می گیرد.

روش کار :

ابتدا با افزودن ddNTPs واکنش های تفکیک شده صورت می گیرد.

پس از آن قطعات تولید شده بر روی ژل پلی اکریل آمید ران می شوند و با استفاده از اتورادیوگراف بر روی ژل ظاهر می گردد.

(قطعات کوتاه تر به علت اینکه از نظر جرم مولکولی سبک تر می باشند در قسمت های پایینی ژل قرار می گیرند.)

در مرحله بعد برای ردیابی محصولات واکنش، باید آن ها را توسط رایواکتیو یا فلورسانس نشاندار کرد. محصولات نشاندار شده تحت تابش اشعه لیزر قرار می گیرند و در نهایت توسط دستگاه sequencer نتایجی مشابه به شکل زیر بدست می آید.

از جمله مهمترین کاربردهای تکنیک تعیین توالی می توان به موارد زیر اشاره کرد:

  • تعیین ناقلیت
  • تشخیص پیش از تولد و تعیین وضعیت جنین در کوتاه ترین مدت
  • تشخیص قبل از لانه گزینی (PGD)
  • تعیین جهش های نقطه ای در ژن عامل بیماری در فرد مبتلا
  • کلونینگ

مزایای شرکت ژن فن پیشرو طب

معتبرترین شرکت سازنده ی دستگاه های توالی یابی (Applied Biosystems-ABI) می باشد، که مرکز ژن فن پیشرو طب به منظور پاسخ دهی همراه با بهترین کیفیت خدمات تعیین توالی به روش سنگر را به وسیله ی دستگاه (Applied Biosystems 3500xl and 3730xl-ABI) در کوتاه ترین زمان ممکن (2 الی 4 روز کاری) انجام می دهد.

 

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *